為了觀察細胞內部結構，識別各種細胞及異常變化，血塗片必須進行染色。
血塗片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變而來。目前常用瑞氏染色法。
目的掌握血塗片的染色方法。
原理
把已制成的血細胞分布均勻的薄膜塗片，
用復合染料染色。
其著色的原理包括物理
吸附及化學親和作用。
不同種類的細胞及同壹細胞的不同成分及不結構，
對酸性及堿性染料
的結合能力不同，因而使不同種類的細胞染成不同的顏色，呈現各自的特點。
器材我們今天的器材是：載玻片、推片、吸耳球、顯微鏡。
試劑
1
瑞氏染料
由酸性染料伊紅(eosin,E)和堿性染料亞甲藍(methylene
blue,M|+)組成的復合染料。
★亞甲藍(又名美藍)為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結構，通常為氯鹽，即氯化美藍。美藍容易氧化為壹、二、三甲基硫堇等次級染料(即天青)。
★伊紅通常為鈉鹽。
★將適量的伊紅，美藍溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。
甲醇的作用：壹是溶解美藍和伊紅ME，使其解離為M+和E+，後兩者可以選擇性地吸附於血細胞內的不同成分而使其著色；
二是具有很強的脫水作用，可固定細胞的形態，當細胞發生凝固時，蛋白質被沈澱為顆粒狀或者網狀，增加細胞結構的表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。
2
瑞氏染液的配制：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油15ml。
操作如下：將全部染料放入清潔幹燥的乳缽中，先加少量甲醇慢慢地研
磨(至少半小時)，以使染料充分溶解，再加壹些甲醇混勻，然後將溶解的部分倒入潔凈的棕色瓶內，乳缽內剩余的未溶解的染料，再加入少許甲醇細研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完為止。再加15ml甘油，密閉保存。這只就是我們配制的I液。
說明：新鮮配制的染液偏堿，染色效果較差，經在室溫下貯存壹定時間，美藍逐漸轉變為天青B後方可使用，這壹過程稱染料成熟。放置時間愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必須蓋嚴瓶口，以免甲醇揮發或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇揮發或氧化，同時也可使血細胞染色較清晰，但我們所用的甲醇必須純凈。
II液：又稱磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氫鉀0.3g，磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至1000ml。
配好後用磷酸鹽溶液校正PH，如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。
也可用蒸餾水代替。
3
染色：①血塗片自然幹燥後，用蠟筆在兩端畫線，以防染色時染液外溢。隨後將玻片平置
於染色架上，滴加染液3-5滴，使其蓋滿血塗片，大約1分鐘後，滴加等量或稍多的II液，
用吸耳球輕輕混勻。
②沖洗：染色5-10分鐘用流水染液，待幹。
③結果觀察，
將幹燥後的血塗片置顯微鏡下觀察。
先用低倍鏡觀察血塗片，
再用油鏡。