該片講述了“小黑蛛”邁爾斯·莫拉萊斯，誓言打破三代蜘蛛俠都曾經歷的“救壹個人還是整個宇宙”的命運魔咒，孤身對抗由蜘蛛俠2099領軍的蜘蛛聯盟的故事。
跟父親關系破裂的格溫·史黛西（海莉·斯坦菲爾德配），在對付來自異時空的反派禿鷲（喬瑪·塔科內配）時，遇到“蜘蛛女俠”傑西卡·德魯（伊薩·雷配）以及堪稱團隊領袖的“蜘蛛俠2099”米格爾·歐哈拉（奧斯卡·伊薩克配），得以前往所有蜘蛛俠的大本營。
另壹邊，成了他所在的宇宙唯壹蜘蛛俠的邁爾斯·莫拉萊斯（沙梅克·摩爾配），雖然本領越來越嫻熟，但不時對自己的身份、跟父母的關系感到十分迷惘，更因為無法見到同伴而倍感孤獨。
而格溫的意外到來，令邁爾斯欣喜不已，兩人卻沒能阻止反派斑點的逃脫。被帶到大本營的邁爾斯，遭到米格爾的敵視，並知道了關於自己身世的大秘密。為了返回所在的宇宙，他不得不跟所有蜘蛛俠大打出手，但事情卻朝著意想不到的方向發展。
《蜘蛛俠：縱橫宇宙》影評
《蜘蛛俠：縱橫宇宙》不僅延續了《蜘蛛俠：平行宇宙》的整體畫風，把漫畫書的質感轉換成電影的視覺風格，產生“漫畫動起來”但又不是常規動畫的特殊觀感，更進壹步，該片創造了多樣畫風的並置。
電影壹開場，明顯是影射達芬奇的怪傑駕著形如大鵬的機械裝置從文藝復興的佛羅倫薩穿越而來，布魯克林警察圍殲中世紀機械大鵬的“大場面”，預示了整部電影古典雜糅先鋒的拼貼式美術風格。
《蜘蛛俠：縱橫宇宙》是為數不多的藝術品，每壹幀都值得掛到博物館的墻上。該片完美致敬了《蜘蛛俠》漫畫，再現了蜘蛛俠的幽默。該片無疑是有史以來最偉大的動畫電影之壹，也是藝術與風格的傑作。